登革病毒核酸检测试剂盒(荧光PCR法)

对登革病毒(Dengue Virus)RNA进行检测,可用于临床对登革的辅助诊断。

  • 产品品牌: REAGEN
  • 产品货号: RN090FP
  • 产品规格: 50/100T
  • 产品适用: 对登革病毒(Dengue Virus)RNA进行检测,可用于临床对登革的辅助诊断。
  • 产地来源: 深圳
  • 保质期: 12个月

【产品名称】

通用名称:登革病毒核酸检测试剂盒(荧光PCR)

【包装规格】

96人份/

【预期用途】

登革病毒(Dengue VirusRNA进行检测,可用于临床对登革的辅助诊断

【检验原理】

本试剂盒采用聚合酶链式反应(PCR)结合Taqman技术,对登革病毒(Dengue Virus)的特异性核酸片段进行荧光PCR检测。

【主要成分】

 

组分成分

96人份/

主要成分

规格

数量

 

 

PCR反应液

 

 

1700μL /

1

引物、探针、脱氧核糖核苷三磷酸(dNTP)、缓冲体系

 

酶混合液

300μL /

1

Taq酶、MMLV

阳性对照

200μL /

1

含目的片段的质粒和内参质粒

阴性对照

500μL /

1

生理盐水

 【储存条件及有效期】

试剂置于-30~-15避光保存,有效期为12个月。本产品反复冻融应不超过5

【适用仪器】

荧光定量PCR仪:ABI 7500荧光PCR.ABI Quantstudio5 Gentier 96RSLAN-96P全自动医用PCR分析系统

【样本要求】

1. 适用样本人血清

2. 样本运输和保存

严格按照临床标本标本保存标本送检中的相关规定执行。

样本保存:待测样本,可立即进行核酸提取处理;如果样本需要在24小时内检测,可先置于2~8保存;如果样本在24小时内无法检测,则可置于-20~-80保存,尽量避免反复冻融,导致假阴性。样本运输:采用低温运输,样本运输应遵守国家关于第二类病原微生物的相关生物安全规定。

 【检验方法】

1. 样本处理

取待测样本200ul,按照核酸提取试剂盒说明书进行核酸提取。

2. 试剂配置(在准备区进行,与扩增区分开,冰上操作

注:试剂使用前要完全解冻,使用前涡旋混匀,10000 rpm离心5 s,确保试剂完全离心至管底,否则会出现装量差异的现象。若有N个待检测样本,则需配置N+2扩增反应(待检样本数N+1个阳性质控品+1个阴性质控品,按下表要求进行扩增反应液的配制,配制完成后充分震荡混匀,10000 rpm离心5 s。按每管20 μl分装至0.2 ml PCR管中,并做好标记扩增反应液需现配现用。


N人份(μL)

PCR反应液

N+2×17

酶混合液

N+2×3

总量

N+2×20

3. 加样在样品处理区进行,冰上操作

按阴性质控品、待测样品、阳性质控品的加样顺序,分别取5μL,加入至已分装扩增反应液的八联管中,反应总体系为25μL。盖紧管盖,短暂离心后置于荧光定量PCR仪中,并记录样本摆放顺序。

4. 扩增反应(在扩增区进行

选择FAM通道检测登革病毒核酸,选择CY5通道检测内标。按以下扩增程序表设置PCR扩增参数。

步骤

温度

时间

循环数

1

逆转录

50

10min

1

2

预变性

95

3min

1

3

变性

95

10sec

45cycle

4

退火延伸及荧光检测

55

30 sec

报告荧光:FAMROXCY5、;淬灭荧光:NONE

5.质量控制


FAM通道Ct

CY5通道Ct值(内部质控品)

阴性对照

UNDET

-

阳性对照

35

35

以上要求需在同一次实验中同时满足,否则,本次实验无效,需重新进行

6.结果判读

反应结束自动保存结果,根据分析后图像调节Baseline Start 值、End 值以及Threshold 值(可以根据实际情况自行调整,Start 值可以在3~15End 值可设在5~20,调整阴性对照的扩增曲线平直或低于阈值线),点击Analysis 自动获得分析结果,在Report 界面观看结果。

试验结果判断


FAM通道

CY5通道

结果判定

1

Ct>40

Ct<35

阴性

2

Ct40

有或无扩增曲线

阳性

3

Ct>40

Ct>35

复检:重新取样检测

 检验结果的解释

1.实验室环境污染,试剂污染,样品交叉污染会出现假阳性结果,如阴性对照检测为阳性,则需做进一步实验来确认是哪类污染。如为试剂污染,需开封新的试剂盒再次进行实验;如为样品交叉污染,应重复实验;如为实验室环境污染,需对实验室进行彻底清洁或更换实验室再进行实验。

2.试剂运输、保存或配制不当会引起试剂检测性能下降,出现假阴性结果。如阳性对照检测为阴性,应开封新的试剂盒再进行实验。

检测方法的局限性

1. 该试剂盒仅为定性产品,不做定量测定。

2. 该试剂盒的检测结果仅供临床参考,对患者的临床诊治应结合其症状或体征、病史、其它实验室检查及治疗反应等情况综合考虑。

3. 当样本的病毒含量低于最低检出限时,可能会出现假阴性。阴性结果仅说明提取的核酸浓度低于该试剂盒的检测极限,但不能完全排除病毒感染的可能

【产品性能指标】

1.准确性企业阳性参考品检测结果全部为阳性,阳性率为15/15

2.最低检测限:该试剂盒最低检测限为500copies/mL。

 注意事项

1.请严格按照操作步骤操作,试剂配制和加样等步骤请严格按照说明书要求在冰上操作。

2试剂配制建议在试剂配制区进行,样品处理要求生物安全柜内操作临床实验室应严格按照《医疗机构临床基因扩增检验实验室管理办法》等有关分子生物学实验室、临床基因扩增实验室的管理规范执行

3.反应液中的成分对光敏感,应避光保存。反复冻融可能降低试剂盒灵敏度,请按检测频次将反应液以适当体积分管保存

4.反应结束后,扩增管请置于密封袋内丢弃,当日清理,切忌开盖。

5.不同批号试剂请勿混合使用,请在有效期内使用试剂盒。

6. 本品仅用于体外诊断


企业愿景

    公司将一如既往的视诚信为最重要的文化精神;在经营决策和管理的全过程中信守“以产品质量、优质服务”为原则和“为人类健康服务”为宗旨的理念;融前沿科技、全球资源与优质人才为资本,以开拓创新、锐意进取、精益求精之精神,科学管理之导向,凝聚员工、客商之合力,同舟共济,为实现人类的食品安全和生物医药业的高速发展不懈奋斗!

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