结核分枝杆菌核酸检测试剂盒(荧光PCR法)

本试剂盒适用于结核感染的定性检测,检测结果可用于结核分枝杆菌感染的辅助诊断。

  • 产品品牌: REAGEN
  • 产品货号: RN090FP
  • 产品规格: 50/100T
  • 产品适用: 本试剂盒适用于结核感染的定性检测,检测结果可用于结核分枝杆菌感染的辅助诊断。
  • 产地来源: 深圳
  • 保质期: 12个月

【产品名称】

通用名称:结核分枝杆菌核酸检测试剂盒(荧光PCR)

【包装规格】

100人份/

【预期用途】

本试剂盒适用于检测痰液样本中的结核分枝杆菌(TB)DNA,可用于结核感染的定性检测检测结果可用于结核分枝杆菌感染的辅助诊断。

【检验原理】

本试剂盒采用聚合酶链式反应(PCR)结合Taqman技术,对结核分枝杆菌Mycobacterium tuberculosis)的特异性DNA核酸片段进行荧光PCR检测。

【主要成分】

 

组分成分

100人份/

主要成分

规格

数量

 

 

PCR反应液

 

 

1887μL /

1

引物、探针、脱氧核糖核苷三磷酸(dNTP)、缓冲体系

 

酶混合液

52μL /

1

Taq酶、UDG

阳性对照

200μL /

1

含目的片段的质粒

阴性对照

500μL /

1

生理盐水

内部质控品

105μL /

1

质粒

 

【储存条件及有效期】

试剂置于-30~-15避光保存,有效期为12个月。本产品反复冻融应不超过5

【适用仪器】

荧光定量PCR仪:ABI 7500荧光PCR.ABI Quantstudio5 Gentier 96RSLAN-96P全自动医用PCR分析系统

【样本要求】

1.适用样本类型:痰液

2.样本采集

以清晨第一口痰为宜,先用清水漱口,嘱咐患者用力咳出深部的痰于无菌保存管,密封,即可送检。

3.样本保存与运送:

上述采集的样本可立即用于检测,或2-8℃保存(不超过24小时),长期保存请置于-20℃。标本运送用冰壶加冰或泡沫箱加冰密封进行运输。

 

 【检验方法】

1. 样本处理

取待测样本200ul,按照核酸提取试剂盒说明书进行核酸提取。

2. 试剂配置(在准备区进行,与扩增区分开,冰上操作

注:试剂使用前要完全解冻,使用前涡旋混匀,10000 rpm离心5 s,确保试剂完全离心至管底,否则会出现装量差异的现象。若有N个待检测样本,则需配置N+2扩增反应(待检样本数N+1个阳性质控品+1个阴性质控品,按下表要求进行扩增反应液的配制,配制完成后充分震荡混匀,10000 rpm离心5 s。按每管20 μl分装至0.2 ml PCR管中,并做好标记扩增反应液需现配现用。


N人份(μL)

PCR反应液

N+2×18.5

内部质控品

N+2×1

酶混合液

N+2×0.5

总量

N+2×20

3. 加样在样品处理区进行,冰上操作

按阴性质控品、待测样品、阳性质控品的加样顺序,分别取5μL,加入至已分装扩增反应液的八联管中,反应总体系为25μL。盖紧管盖,短暂离心后置于荧光定量PCR仪中,并记录样本摆放顺序。

4. 扩增反应(在扩增区进行

选择FAM通道检测结核分枝杆菌核酸,选择CY5通道检测内标。按以下扩增程序表设置PCR扩增参数。

步骤

温度

时间

循环数

1

预变性

95

3min

1

3

变性

95

10sec

45cycle

4

退火延伸及荧光检测

60

30 sec

报告荧光:FAMCY5;淬灭荧光:NONE

 5.质量控制


FAM通道Ct值

CY5通道Ct值(内部质控品)

阴性对照

UNDET

≤35

阳性对照

≤35

以上要求需在同一次实验中同时满足,否则,本次实验无效,需重新进行。

6.结果判读

反应结束自动保存结果,根据分析后图像调节Baseline Start 值、End 值以及Threshold 值(可以根据实际情况自行调整,Start 值可以在3~15End 值可设在5~20,调整阴性对照的扩增曲线平直或低于阈值线),点击Analysis 自动获得分析结果,在Report 界面观看结果。

试验结果判断


FAM通道

CY5通道

结果判定

1

Ct>40

Ct<35

阴性

2

Ct40

有或无扩增曲线

阳性

3

Ct>40

Ct>35

复检:重新取样检测

 

检验结果的解释

1.实验室环境污染,试剂污染,样品交叉污染会出现假阳性结果,如阴性对照检测为阳性,则需做进一步实验来确认是哪类污染。如为试剂污染,需开封新的试剂盒再次进行实验;如为样品交叉污染,应重复实验;如为实验室环境污染,需对实验室进行彻底清洁或更换实验室再进行实验。

2.试剂运输、保存或配制不当会引起试剂检测性能下降,出现假阴性结果。如阳性对照检测为阴性,应开封新的试剂盒再进行实验。

检测方法的局限性

1. 该试剂盒仅为定性产品,不做定量测定。

2. 该试剂盒的检测结果仅供临床参考,对患者的临床诊治应结合其症状或体征、病史、其它实验室检查及治疗反应等情况综合考虑。

3. 当样本细菌含量低于最低检出限时,可能会出现假阴性。阴性结果仅说明提取的核酸浓度低于该试剂盒的检测极限,但不能完全排除细菌感染的可能

【产品性能指标】

1.准确性企业阳性参考品检测结果全部为阳性,阳性率为15/15

2.最低检测限:该试剂盒最低检测限为500copies/mL。

 

注意事项

1.请严格按照操作步骤操作,试剂配制和加样等步骤请严格按照说明书要求在冰上操作。

2试剂配制建议在试剂配制区进行,样品处理要求生物安全柜内操作临床实验室应严格按照《医疗机构临床基因扩增检验实验室管理办法》等有关分子生物学实验室、临床基因扩增实验室的管理规范执行

3.反应液中的成分对光敏感,应避光保存。反复冻融可能降低试剂盒灵敏度,请按检测频次将反应液以适当体积分管保存

4.反应结束后,扩增管请置于密封袋内丢弃,当日清理,切忌开盖。

5.不同批号试剂请勿混合使用,请在有效期内使用试剂盒。

6. 本品仅用于体外诊断


企业愿景

    公司将一如既往的视诚信为最重要的文化精神;在经营决策和管理的全过程中信守“以产品质量、优质服务”为原则和“为人类健康服务”为宗旨的理念;融前沿科技、全球资源与优质人才为资本,以开拓创新、锐意进取、精益求精之精神,科学管理之导向,凝聚员工、客商之合力,同舟共济,为实现人类的食品安全和生物医药业的高速发展不懈奋斗!

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