猫衣原体核酸检测试剂盒(荧光PCR法)

对猫眼鼻分泌物中猫衣原体DNA进行检测。

  • 产品品牌 REAGEN
  • 产品货号 RPD990204
  • 产品规格 50/100T
  • 产品适用 对猫眼鼻分泌物中猫衣原体DNA进行检测。
  • 产地来源 深圳

【产品名称】

通用名称:猫衣原体核酸检测试剂盒(荧光PCR)

【包装规格】

50人份/

【预期用途】

猫眼鼻分泌物中猫衣原体DNA进行检测

【检验原理】

本试剂盒采用聚合酶链式反应(PCR)结合Taqman技术,对猫衣原体的特异性DNA核酸片段进行荧光PCR检测。

【主要成分】

 

组分成分

50人份/

主要成分

规格

数量

 

PCR反应液

 

1014μL /

 

1

引物、探针、脱氧核糖核苷三磷酸(dNTP)、缓冲体系

酶混合液

26μL /

1

Taq酶、UDG

阳性对照

200μL /

1

含目的片段的质粒

阴性对照

500μL /

1

生理盐水

 【储存条件及有效期】

试剂置于-30~-15避光保存,有效期为12个月。本产品反复冻融应不超过5

【适用仪器】

荧光定量PCR仪:ABI 7500荧光PCR.ABI Quantstudio5 Gentier 96RSLAN-96P全自动医用PCR分析系统

【样本要求】

眼鼻分泌物

【检验方法】

1. 样本处理

请根据具体样本类型选用适当的核酸提取试剂(自备) 并按照该试剂的说明书提取 DNA。提纯后的核酸应尽快用于检测,或-20℃保存。

2. 试剂配置(在准备区进行,与扩增区分开,冰上操作

注:试剂使用前要完全解冻,使用前涡旋混匀,10000 rpm离心5 s,确保试剂完全离心至管底,否则会出现装量差异的现象。若有N个待检测样本,则需配置N+2扩增反应(待检样本数N+1个阳性质控品+1个阴性质控品,按下表要求进行扩增反应液的配制,配制完成后充分震荡混匀,10000 rpm离心

5 s。按每管20μL分装至0.2 ml PCR管中,并做好标记扩增反应液需现配现用。


N人份(μL)

PCR反应液

N+2×19.5

酶混合液

N+2×0.5

总量

N+2×20

3. 加样在样品处理区进行,冰上操作

按阴性质控品、待测样品、阳性质控品的加样顺序,分别取5μL,加入至已分装扩增反应液的PCR管中,反应总体系为25μL。盖紧管盖,短暂离心后置于荧光定量PCR仪中,并记录样本摆放顺序。

4. 扩增反应(在扩增区进行

选择FAM通道检测猫衣原体核酸。按以下扩增程序表设置PCR扩增参数。

步骤

温度

时间

循环数

1

预变性

95

3min

1

2

变性

95

10sec

45cycle

3

退火延伸及荧光检测

55

30 sec

报告荧光:FAM;淬灭荧光:NONE

5. 质量控制


FAM通道Ct

阴性对照

UNDET

阳性对照

35

以上要求需在同一次实验中同时满足,否则,本次实验无效,需重新进行。

6.结果判读

反应结束自动保存结果,根据分析后图像调节Baseline Start 值、End 值以及Threshold 值(可以根据实际情况自行调整,Start 值可以在3~15End 值可设在5~20,调整阴性对照的扩增曲线平直或低于阈值线),点击Analysis 自动获得分析结果,在Report 界面观看结果。

试验结果判断


通道

阳性判断条件

1

FAM

Ct40,且扩增曲线呈典型S,报告阳性

2

FAM

Ct>40报告为阴性。

检验结果的解释

1. 实验室环境污染,试剂污染,样品交叉污染会出现假阳性结果,如阴性对照检测为阳性,则需做进

一步实验来确认是哪类污染。如为试剂污染,需开封新的试剂盒再次进行实验;如为样品交叉污染,应重复实验;如为实验室环境污染,需对实验室进行彻底清洁或更换实验室再进行实验。

2. 试剂运输、保存或配制不当会引起试剂检测性能下降,出现假阴性结果。如阳性对照检测为阴性,

应开封新的试剂盒再进行实验。

检测方法的局限性

1. 该试剂盒仅为定性产品,不做定量测定。

2. 当样本病毒含量低于最低检出限时,可能会出现假阴性。阴性结果仅说明提取的核酸浓度低于该试剂盒的检测极限,但不能完全排除病毒感染的可能

【产品性能指标】

1.准确性企业阳性参考品检测结果全部为阳性,阳性率为15/15

2.最低检测限:该试剂盒最低检测限为500copies/mL。

注意事项

1.请严格按照操作步骤操作,试剂配制和加样等步骤请严格按照说明书要求在冰上操作。

2试剂配制建议在试剂配制区进行,样品处理要求生物安全柜内操作临床实验室应严格按照《医疗机构临床基因扩增检验实验室管理办法》等有关分子生物学实验室、临床基因扩增实验室的管理规范执行

3.反应液中的成分对光敏感,应避光保存。反复冻融可能降低试剂盒灵敏度,请按检测频次将反应液以适当体积分管保存

4.反应结束后,扩增管请置于密封袋内丢弃,当日清理,切忌开盖。

5.不同批号试剂请勿混合使用,请在有效期内使用试剂盒。

6. 本品仅用于体外诊断


企业愿景

    公司将一如既往的视诚信为最重要的文化精神;在经营决策和管理的全过程中信守“以产品质量、优质服务”为原则和“为人类健康服务”为宗旨的理念;融前沿科技、全球资源与优质人才为资本,以开拓创新、锐意进取、精益求精之精神,科学管理之导向,凝聚员工、客商之合力,同舟共济,为实现人类的食品安全和生物医药业的高速发展不懈奋斗!

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